Laboratorio de Pruebas Biológicas
(PB)
El Laboratorio de Pruebas Biológicas del Instituto de Química de la UNAM proporciona servicio de apoyo a la investigación con los diversos métodos de prueba que tiene estandarizados. El servicio está disponible para usuarios internos de la UNAM y para externos. El laboratorio cuenta con el equipo y personal capacitado que permite ofrecer un servicio de calidad en la obtención de los resultados. La M. en C. Ma. Teresa Ramírez Apan y el M. en C. Antonio Nieto Camacho son los Técnicos Académicos responsables de realizar los bioensayos y de apoyar al usuario del servicio en los aspectos estadísticos y de interpretación de resultados.
Nota
Formato de resultados
Contacto
Dra. Patricia Cano Sánchez/ Secretaria Técnica
Lector de Placas SYNERGY HT, BioTek.
Lavador de placas ELx405, BioTek.
Campana de Flujo Laminar, ESCO.
Incubadora de CO2, ESCO.
Contador automatizado de células TC20, BIO-RAD.
Centrífuga clínica 228, Fisher Scientific.
Centrífuga refrigerada 5415R, Eppendorf.
Balanza analítica BP61S, Sartorius.
Microscopio óptico invertido DIAPHOT 300, Nikon.
Potenciómetro 50 pH Meter, Beckman.
Ultracongelador Ultima II, REVCO.
Autoclave vertical, Boyer.
El laboratorio cuenta con un bioterio para realizar las pruebas in vivo.
Evaluar la inhibición del crecimiento de líneas de cáncer humano en cultivo.
Evaluar la capacidad de antioxidante de sustancias puras o mezclas.
Determinación de la actividad antiinflamatoria de extractos vegetales y compuestos químicos orgánicos e inorgánicos.
Todos los análisis que realiza el laboratorio son de tipo cuantitativo, para trámites ante instancias gubernamentales y cumplir con los requisitos.
Determinación de la toxicidad aguda en ratones y crustáceos de compuestos y extractos.
Actividad citotóxica en líneas celulares cancerosas de humano siguiendo el protocolo de Sulforrodamina B descrito por el Instituto Nacional del Cáncer de los Estados Unidos de Norteamérica.
Viabilidad celular en cultivos celulares de cáncer humano y células sanas de acuerdo al protocolo de la ruptura de la sal de tetrazolio (MTT).
Toxicidad aguda en Artemia salina.
Actividad antiinflamatoria de compuestos de naturaleza esteroidal y no esteroidal mediante los siguientes modelos:
Edema inducido con la aplicación tópica de 13-acetato de 12-O-Tetradecanoil-forbol (TPA) en la oreja de ratón.
Cuantificación del contenido de la enzima mieloperoxidasa en biopsias de oreja de ratón inflamada.
Actividad analgésica en el modelo de Contracción abdominal inducida con ácido acético en ratón (Writhing).
Actividad antioxidante:
Cuantificación de la reducción del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH).
Inhibición de la peroxidación de lípidos inducida con FeSO4 o AAPH en homogeneizado de cerebro de rata.
Inhibición de la enzima alfa glucosidasa de levadura y de intestino de rata.
Inhibición de la enzima aceltilcolinesterasa de anguíla eléctrica y humana.
Toxicidad oral aguda con base en el protocolo de la OECD.
Las pruebas que se realizan en dos etapas: cernimiento primario (una sola concentración) y curvas concentración – respuesta (4 a 6 concentraciones). Para las curvas concentración – respuesta es necesario hacer entre tres y cinco experimentos independientes para obtener la Concentración Inhibitoria 50 (CI50) ± ESM (error estándar de la media).
Para las muestras externas (STE, STA) que se someten a cernimiento primario el tiempo de entrega de resultados es de 3 a 4 semanas, debido a que se hacen al menos tres experimentos independientes para reportar la reproducibilidad de actividad de la muestra (Promedio ± ESM).
Para las muestras que se someten a curvas concentración – respuesta el Investigador deberá ser informado vía telefónica o por correo electrónico que los resultados finales de la IC50 se tendrán de 1 a 3 meses dependiendo del número de líneas celulares que se sometan para la IC50 y de la cantidad de muestras en espera.
Con el objetivo de proporcionar un servicio satisfactorio se le solicita al usuario que sus muestras cumplan con los siguientes requisitos:
Para cernimiento primario se requiere entre 1 a 2 mg de muestra.
Para la curva de concentración-respuesta que requieren 20 mg de la muestra
La solubilidad debe ser mayor o igual a 20 mg/mL para extractos o fracciones y de 20 mM para compuestos puros.
Para los experimentos de citotoxicidad la muestra debe ser soluble exclusivamente en dimetilsulfóxido, etanol, metanol o agua.
Para las demás pruebas la muestra deben ser completamente soluble en alguno de los siguientes disolventes: metanol, etanol, acetona, cloroformo, dimetilsulfóxido o agua.
El usuario es el responsable de pesar correctamente de la muestra y de la pureza de la misma. Para curvas concentración-respuesta la muestra debe ser del mismo lote con el que se solicitó el cernimiento.
El usuario debe garantizar que al pesar una muestra, la incertidumbre de la pesada sea menor o igual al 10%.
Para los experimentos de citotoxicidad la muestra debe ser soluble exclusivamente en dimetilsulfóxido, etanol, metanol o agua. Para las demás pruebas la muestra deben ser completamente soluble en alguno de los siguientes disolventes: metanol, etanol, acetona, cloroformo, dimetilsulfóxido o agua.
Actividad citotóxica y viabilidad celular.
Ensayo de cernimiento: 15 días hábiles.
Curvas concentración respuesta: 1 a 3 meses.
Las demás pruebas tienen un periodo de entrega entre 5 a 25 días hábiles.
Los tiempos de entrega son en condiciones normales de trabajo y pueden variar dependiendo de la carga de trabajo del laboratorio.
El tiempo de promesa de entrega de resultados empieza a correr el día que el usuario entrega los animales al personal de LPB. En el caso de muestras ingresadas por la Secretaria Técnica, ésta proveerá los animales.